免疫濁度分析方法

來源：http://m.nbhaoyang.com/ 作者：余氯檢測儀 時間：2018-12-24

　　【關鍵詞】 免疫濁度分析;鉤狀效應

　　在免疫濁度分析中，抗原、抗體形成的沉淀量起初隨著樣本濃度的增加而增加，但當樣本濃度過高時，沉淀量隨著樣本濃度的增加反而減少，使反映信號弱化，信號-劑量(濃度)曲線呈鉤狀現象，而儀器是據沉淀量蟬翼的濁度計算結果的，因此當樣本濃度過高，測出的結果必然不準確。為此，我們以ApoA1為例，通過對儀器試劑測量范圍極限值上限和儀器自動稀釋重做功能進行設置，探討免疫濁度分析中鉤狀效應的防范。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料 選取我院2004年4～12月門診及住院樣本中ApoA1超過測量范圍上限的樣本12例。儀器及試劑采用OLYMPUS AU400生化分析儀和浙江伊利康生物技術有限公司試劑(批號：04112)。校準液及質控品采用浙江伊利康生物技術有限公司校準液(批號：04112)和北京中生北控物公司質控產品(批號：022321)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 儀器校準 每周用伊利康校準液對OLYMPUS AU400生化分析儀校正1次。

　　1.2.2 質量控制 中生公司控品在OLYMPUS AU400上每日進行室內質控，用平時建立的質控圖對質控結果進行監測，當質控結果符合要求后方可開始本樣本測定。

　　1.2.3 實驗方法 首先對儀器的試劑測量范圍上限和儀器自動稀釋重做功能進行設置，然后對設置前超過測量范圍上限的樣本進行設置前后測定值比較并進行配對資料的符號秩和檢驗。

　　1.2.4 儀器設置 ApoA1試劑測量范圍極限值(Dynanic)上限設為2.20，自動重復(Auto repeat)和重復數據覆蓋(Repeat Data Overwrite)都選擇Yes，稀釋或模式(Diluted OR Mode)中選中F，特殊重復(Repeat special)中實驗項目(Test Name)選擇為ApoA1,稀釋(Diluted)樣本體積(Sample Volume)仍設為2，系統(System)下試驗申請(Test Requisition)中常規(Routine)設為架子編號方式(Rack NO.)，自動/標準重復(Auto/Standard Repeat)設為Auto。

　　1.3 統計學處理 數據比較采用秩和檢驗和t檢驗。

　　2 結果

　　對儀器試劑測量范圍極限值上限和儀器自動稀釋重做。

　　對樣本儀器設置前后測定值進行配對資料的符號秩和檢驗，其差異有統計學意義(P<0.05=，儀器設置后測定組與設置前且人工對倍稀釋測定組測定值進行配對資料t檢驗，其差異無統計學意義(P>0.05)。

　　3 討論

　　試劑的檢測范圍是0.50～2.20 g/L，當樣本濃度超過2.20 g/L時檢測出現鉤狀效應，則應將樣本人工或儀器自動做1∶1稀釋后測定，因此將測量范圍極限值上限設為2.20 g/L，本研究主要探討儀器自動稀釋功能。當測定樣本濃度大于4.40 g/L時，即使通過儀器自動稀釋(因設置對倍稀釋)后的測定樣本濃度讓大于測量范圍極值上限2.20 g/L的檢測同樣存在鉤狀效應，因此，當樣本濃度高于4.40 g/L，通過儀器自動稀釋功能測定的樣本結果與樣本真值之間仍存在較大的差異，此時必須加大樣本的稀釋倍數。

　　通過對儀器設置前超過測量范圍上限的樣本進行設置前后測定值比較可知，ApoA1低于4.40 g/L的樣本在儀器設置前后測定值差異有統計學意義(P<0.05);通過對儀器設置后測定組與設置前且人工對倍稀釋測定組測定值無統計學意義(P>0.05)及免疫濁度分析原理可知，設置后測定組比設置前測定組樣本測定值更接近樣本真值。

　　通過儀器的設置，濃度低于4.40 g/L的ApoA1樣本，儀器均可以自動測定，不需要每個樣本專門添加復原來檢測是否存在鉤狀現象，不用在儀器不報警的情況下人工檢查結果或結果標記，不用人工稀釋樣本，操作簡便、準確。

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